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甘油檢測(cè)試劑盒的樣本處理方法

點(diǎn)擊次數(shù):752     更新時(shí)間:2022-11-09

 甘油檢測(cè)試劑盒的樣本處理方法


甘油是甘油三酯的水解產(chǎn)物。與游離脂肪酸一樣,甘油含量是甘油三酯水解反應(yīng)的可靠檢測(cè)指標(biāo),但檢測(cè)更加方便。本試劑盒采用優(yōu)化步驟,能夠檢測(cè)實(shí)體組織、細(xì)胞中的甘油含量,線性范圍為10-1200µmol/L。原理:在 ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化為 3-磷酸甘油,再被甘油磷酸氧化酶氧化產(chǎn)生過氧化氫;在過氧化物酶作用下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺,其光密度值與甘油濃度成正比。適用范圍:測(cè)定實(shí)體組織、細(xì)胞中的甘油濃度。


組成 (105 次微板測(cè)定或 30 次 1 ml 比色杯測(cè)定):

(1) 裂解液 50 ml

(2) R1 試劑 16 ml

(3) R2 試劑 4 ml

(4) 4 mmol/L 甘油標(biāo)準(zhǔn)品 1 ml4 oC

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所需設(shè)備:酶標(biāo)儀、生化分析儀或 721、722 型可見光分光光度計(jì)。最佳工作波長(zhǎng) 550nm,如無此波長(zhǎng)建議優(yōu)先選用 570nm、次選 530、490nm。

一 組織細(xì)胞裂解細(xì)胞(包括分化的脂肪細(xì)胞)裂解:消化、離心收集細(xì)胞。或直接在培養(yǎng)皿內(nèi)裂解。通常6孔板單孔約2x106個(gè)細(xì)胞,75cm2瓶約1x107細(xì)胞。按比例每 1~2 x 106細(xì)胞加 0.1ml 裂解液,震蕩或渦旋裂解后,靜置 10 分鐘。

動(dòng)物組織裂解:切記要預(yù)先將新鮮組織剪切稱重后再進(jìn)行保存。組織凍存后再進(jìn)行解凍、剪切、稱重可能會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的測(cè)量誤差。離心管精確稱重,加入組織塊后再稱重,二者相減(即減量稱重法)計(jì)算組織重量(約 100mg)。

強(qiáng)烈建議按比例每 1mg 組織加10µl裂解液以減少樣品間蛋白和脂質(zhì)含量變異而產(chǎn)生的誤差。(注意;裂解液用量在 1ml 或更多可保證有效的裂解與脂質(zhì)提取)。用電動(dòng)高速勻漿器或手動(dòng)玻璃勻漿器破碎組織。(不推薦超聲方法,因其不能和均勻破碎。應(yīng)根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整初始的組織細(xì)胞加入量),而后,靜置 10 分鐘。


 甘油檢測(cè)試劑盒的樣本處理方法

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