供應DEAE-Sepharose Fast Flow

DEAE-瓊脂糖凝膠FF，DEAE-Sepharose Fast Flow

DEAE-瓊脂糖凝膠FF是將二乙胺基乙基鍵合在快流速瓊脂糖凝膠上形成的一種弱陰離子交換介質(zhì)。廣泛 用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的離子交換制備。 本品呈白色，球狀、無嗅、無味、無肉眼可見雜質(zhì)。 

適用范圍 本產(chǎn)品具有高化學穩(wěn)定性、高流速、高載量、好的機械性能、可在位清洗、多次重復使用等特點，非特 異性吸附低，回收率高，適用于工業(yè)規(guī)模生物試劑，適用于在 pH 工作范圍內(nèi)可形成負離子的生物大分子的分離 純化，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的離子交換制備。

注意事項 產(chǎn)品應密封貯存在 4℃~25℃（保存溶液為 20% 乙醇），通風、干燥、清潔的地方。不能冷凍。

用過的柱子貯存在 4℃（20% 乙醇）。 本產(chǎn)品避免與氧化劑接觸；避免在 pH 值 < 4 時長時間暴露(一周，20℃)。 保質(zhì)期：5 年。 

操作步驟：

1、裝柱 （1）讓所有的材料和試劑達到室溫。配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。 （2）根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉 20%乙醇，抽干，用初始緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1 的 比例）配成勻漿。 （3）將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務必使底端無氣泡。 （4）用玻璃棒引導勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在 柱內(nèi)自由沉降，連結好柱子頂端柱頭。 （5）打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的 1.33 倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定。用 2~3 倍柱體積的緩沖 液平衡柱子。

2、平衡 讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導和 pH 不變。平衡液是低濃度的緩沖溶液，如 Tris 、 PBS 等。

3、上樣 （1）樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。鹽濃度太大的樣品處理后再配。 （2）一般情況是讓目標產(chǎn)品結合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標產(chǎn)品。 （3）介質(zhì)對樣品組分吸附的程度取決于樣品的帶電性質(zhì)、流動相的離子強度和 pH 值。鹽濃度小，介質(zhì) 對樣品組分吸附較牢。用 DEAE 介質(zhì)時，的 pH 值是大于目標產(chǎn)品等電點 1 個單位。

4、洗脫 DEAE 介質(zhì)可用增大鹽濃度或減小 pH 值進行洗脫，常用增大鹽濃度的辦法洗脫。

5、再生 一般用高鹽濃度的緩沖液（含 1~2mol/L NaCl）洗或減小 pH 洗 10 倍以上柱體積，接著用結合蛋白的平 衡液洗到平衡，可再次使用。 若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

6、在位清洗 （1）對于以離子鍵結合上去的蛋白，可以用 2M Nacl 去除。 （2）對沉淀蛋白、對以疏水性結合的蛋白或脂類，可用 1M NaOH 去除。 （3）對強疏水性結合的蛋白、脂類等，用 4~10 倍柱體積的 70%乙醇或 30%異丙醇清洗，但要注意有機 溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。 清洗完畢后，用至少 3 倍緩沖液平衡柱子。

7、注意 在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干，氣泡進入。 在使用過程中，不能使用強酸，如使用酸洗，應使用濃度低于 0.1 M 的冰醋酸。

8、去熱源 用 0.5M 的氫氧化鈉清洗柱子 5~6 小時或用 0.1M 的氫氧化鈉 24 小時。或用以下方法步驟去除： （1）2 倍柱體積的 70%乙醇； （2）2 倍柱體積 50mM Tris-HCl pH7.5； （3）1 倍柱體積 4M 尿素； （4）3 倍柱體積的 Tris 緩沖液+0.1M Nacl； 以上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。

9、 消毒 用 0.5~1M NaOH 室溫下洗 8~10 倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。

10、滅菌 置介質(zhì)于高壓滅菌鍋中 120℃下 30 分鐘。

 DEAE-瓊脂糖凝膠FF，DEAE-Sepharose Fast Flow

信帆生物供應 DEAE-瓊脂糖凝膠FF，該產(chǎn)品是我司優(yōu)勢產(chǎn)品，貨品充足。

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