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NHS活化瓊脂糖凝膠FF

NHS活化瓊脂糖凝膠FF
英文名稱:NHS activated-Berpharose FF
貨號:B2828
規格:10ml
本產品僅供科研實驗用,不做其它用途!

產品型號:

更新時間:2025-02-13

NHS活化瓊脂糖凝膠FF


英文名稱:NHS activated-Berpharose FF


貨號:B2828


規格:10ml


1.      產品介紹


NHS-瓊脂糖凝膠FF是一種將瓊脂糖凝膠微球用NHS活化形成的生物親和層析分離


介質。該產品保留了瓊脂糖極-好的親水性及大網架結構,同生物活性大分子有很好的相容性,具有載量高、非特異性吸附少和流速快等特點。本活化的瓊脂糖凝膠能溫和地同氨基基團反應,特別適合偶聯抗體、鏈霉親和素、酶和核酸等功能性生物大分子。


2.規格


1ml、10ml、100ml、500ml 使用方法


應用舉例:


NHS-瓊脂糖凝膠FF偶聯抗體


①配制抗體:取100 mg IgG用10 ml偶聯緩沖液(0.2 M NaHCO3,0.5 M NaCl,pH8.3)溶解。


②偶聯反應:取10 ml NHS-瓊脂糖凝膠FF,用50 ml的1 mM HCl分三次清洗去除保存液,之后立即加入到抗體偶聯溶液中,4℃振蕩偶聯6 h或者偶聯過夜。


③封閉:上述溶液過濾,用50 ml偶聯緩沖液清洗偶聯后的凝膠,用10 ml封閉緩沖液(0.2 M NaHCO3,0.5 M NaCl,0.5 M乙醇胺,pH8.3)于室溫振蕩4 h(或者過夜)以封閉未偶聯的基團,之后用20 ml蒸餾水清洗干凈即可。


④檢測:用SDS-PAGE檢測偶聯前后的反應液并計算偶聯效率,偶聯好的填料根基特性測定功能和載量。


 

5.注意事項:


1)偶聯緩沖液可以是碳酸鹽、硼酸鹽和磷酸鹽緩沖液,但絕對不能使用氨基緩沖體系(如Tris-HCl緩沖液)。


2)穩定的配基可以直接溶于0.2 M NaHCO3,可適當提高偶聯溫度(如室溫)將偶聯時間縮短至1~2 h。


3)如對配基的穩定性不夠了解,可以選擇不同pH值緩沖液和不同溫度,用0.5~1 ml配基相應濃度的溶液,在無填料的條件下模擬偶聯反應,觀察溶液是否會產生沉淀。有沉淀產生說明偶聯效果不佳,可適當降低緩沖液pH值或溫度。同時可以添加約5%的甘油或PEG保護蛋白,避免產生沉淀。


4)根據偶聯蛋白的穩定性選擇合適的偶聯pH值和溫度。偶聯較適pH值為pH7.5~9.0,室溫或4℃均可。提高偶聯溫度能夠提高配基的偶聯效率。


5)偶聯蛋白溶液的濃度以5~15 mg/ml為佳。偶聯凝膠體積和配基溶液的體積比以1:0.5~1:2.0為佳。


6)如果偶聯的配基不穩定,可于4℃振蕩偶聯1~12 h以維持配基的活性。偶聯配基后應盡快清洗填料,避免配基在高pH條件下失活。


7)封閉緩沖液一般使用帶氨基的小分子試劑,如乙醇胺、Tris等。于pH8~9、室溫條件下封閉數小時可完-全封閉。推薦封閉緩沖液:0.5 M乙醇胺,0.5 M NaCl,pH8.3或0.1 M Tris-HCl,pH8.5。


8)偶聯中盡量使用溫和的混勻方式,如振蕩、翻轉和旋轉等,如使用磁力攪拌器或者機械攪拌,需要降低攪拌速度,使填料能夠混勻完-全懸浮即可,避免劇烈攪拌導致凝膠微球破碎。


9)NHS-瓊脂糖凝膠FF需現取現用,避免取出后放置時間過長導致活性降低。


10)僅供科研實驗使用


NHS活化瓊脂糖凝膠FF

 


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