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微量分型巰基測試盒 生化試劑

微量分型巰基測試盒,5,5’-二硫代雙,2-硝基苯甲酸(DTNB)與巰基化合物反應(yīng)時(shí)能產(chǎn)生一種黃色化合物,可進(jìn)行比色定量測定。

產(chǎn)品型號:

更新時(shí)間:2025-01-23

微量分型巰基測試盒

(酶標(biāo)微板法)

一、試劑的組成與配制:(24T

試劑一:標(biāo)準(zhǔn)品粉劑,3 支,4℃密封保存 6 個(gè)月。

10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)品貯備液的配制:每次測定前將 1 標(biāo)準(zhǔn)品

粉劑 1mL 試劑三-緩沖液溶解,即為 10mmol/L

標(biāo)準(zhǔn)品貯備液,4℃密封保存。

500μmol/L 的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液的配制:10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)品∶試劑

三緩沖液=119 20 倍稀釋配成應(yīng)用液,按所

需量現(xiàn)用現(xiàn)配。

試劑二:透明劑,2mL×1 瓶,4℃密封保存 12 個(gè)月(天冷

時(shí)會(huì)凝固,每次測試前適當(dāng)水浴加溫以加速溶解,

直至透明方可應(yīng)用)。

試劑三:緩沖液,20mL×1 瓶,4℃密封保存 6 個(gè)月。

試劑四:顯色劑,3mL×1 瓶,4℃避光保存 6 個(gè)月。

工作液一的配制:按透明劑∶緩沖液∶顯色劑=15025

的比例混合,用多少配多少。

工作液二的配制:按透明劑∶緩沖液=175 的比例混合,用

多少配多少。

注:按所需檢測的樣本數(shù)加上標(biāo)準(zhǔn)孔及標(biāo)準(zhǔn)空白孔的數(shù),

再放寬 2 孔進(jìn)行工作液的配制(避免吸到最后試劑

量不夠)。工作液需現(xiàn)用現(xiàn)配,最多可保存 12 天。

試劑五:沉淀劑,10mL×1 瓶,室溫保存 6 個(gè)月(過飽和溶

液,如有結(jié)晶析出,直接取上清使用)。

96 孔板:一塊(本公司贈(zèng)送)。

二、操作步驟:

1、血清(漿)樣本前處理:

①、總巰基:

直接取樣進(jìn)行測定。

②、非蛋白巰基:

待測樣本:取血清(漿)50μL,加入 150μL 試劑五

沉淀劑(也可按照樣本:試劑五=13

比例上下調(diào)整),充分混勻 3500-4000

轉(zhuǎn)/分離心 10 分鐘,取上清 10μL 待測;

待測標(biāo)準(zhǔn): 500μmol/L 的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液 50μL,加

150μL 試劑五沉淀劑,充分混勻后取

10μL 待測(此時(shí)標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液濃度為

125μmol/L

2、動(dòng)、植物組織、培養(yǎng)細(xì)胞前處理:

動(dòng)物組織:準(zhǔn)確稱取待測動(dòng)物組織的重量,按重量體

積比(動(dòng)物組織︰生理鹽水1g9mL),將動(dòng)物

組織剪碎后加生理鹽水用勻漿機(jī)或勻漿管制備成

10%的動(dòng)物組織勻漿,25003000 轉(zhuǎn)/分,離心 10

分鐘取上清(即 10%組織勻漿)待測。

植物組織:準(zhǔn)確稱取待測植物組織的重量,按重量體

積比(植物組織︰01mol /L pH77.4 磷酸鹽緩

沖液1g9mL),將植物組織剪碎后加 0.1mol/L

pH 77.4 磷酸鹽緩沖液用勻漿機(jī)或勻漿管制備成

10%的植物組織勻漿,35004000 轉(zhuǎn)/分,離心 10

分鐘取上清(即 10%組織勻漿)待測。

培養(yǎng)細(xì)胞:將細(xì)胞進(jìn)行胰-酶消化(也可將細(xì)胞直接刮

下),取出細(xì)胞及液體放入試管,1000 轉(zhuǎn)/分~3000

轉(zhuǎn)/分,離心 5 分鐘,棄上清,留沉淀細(xì)胞,再加

1mL 生理鹽水輕輕吹打混勻(將胰-酶及部分培

養(yǎng)液洗去),1000 轉(zhuǎn)/分~3000 轉(zhuǎn)/分,離心 5 分鐘,

棄上清,留沉淀細(xì)胞加入 0.20.3mL 的生理鹽水

進(jìn)行勻漿(勻漿的方法有多種:例如

加細(xì)胞裂

解液裂解細(xì)胞;② 在冰水浴下超聲粉碎細(xì)胞;③

手動(dòng)勻漿管進(jìn)行勻漿;④ 在冰水浴下用卡富隆電

動(dòng)玻璃勻漿器電動(dòng)研磨,每次 510 秒,間隔 20

秒,總共研磨 34 次),取勻漿液待測。

①、總巰基:直接取樣進(jìn)行測定。

②、非蛋白巰基:

待測樣本:取勻漿 50μL,加入 150μL 試劑五沉淀劑

(也可按照樣本:試劑五=13 比例上

下調(diào)整),充分混勻,3500-4000 轉(zhuǎn)/

離心 10 分鐘,取上清 10μL 待測;

待測標(biāo)準(zhǔn): 500μmol/L 的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液 50μL,加

150μL 試劑五沉淀劑,充分混勻后取

10μL 待測(此時(shí)標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液濃度為

125μmol/L)。

四、測定原理:

55’-二硫代雙,2-硝基苯甲酸(DTNB)與巰基化合

物反應(yīng)時(shí)能產(chǎn)生一種黃色化合物,可進(jìn)行比色定量測定。

五、所需儀器:

單道移液器:可進(jìn)行單孔的加樣工作

多道移液器:可進(jìn)行 8 12 孔的加樣工作

酶標(biāo)儀,用于微量樣品比色分析,吸光度值測定

96 孔酶標(biāo)板:用于比色的孔板(本所贈(zèng)送)

六、檢測意義:

活性巰基(SH)主要存在于半胱-氨-酸,是蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)

和生物體內(nèi)某些氧化還原反應(yīng)重要基團(tuán)。在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中

2 個(gè)巰基脫氫而形成的雙硫鍵,使相鄰多肽得以連接.對

于維持蛋白質(zhì)完整結(jié)構(gòu)十分重要。所有動(dòng)物組織都含有不

同量的活性巰基,機(jī)體內(nèi)起重要作用的谷-胱-甘-肽,其生理

作用主要是靠所含半胱-氨-酸中活性巰基起還原作用。巰基

還是很多酶活性基團(tuán),一些重金屬鹽如 Hg 2+等與酶巰基結(jié)

合,影響酶活性。巰基化合物與機(jī)體許多機(jī)能活動(dòng),藥物

及毒物的作用以及某些疾病的發(fā)生發(fā)展有著密切關(guān)系。測

定組織和血液中巰基含量已日益為人們所重視,以期探索

對某些疾病的發(fā)生機(jī)理、治療、預(yù)防以及預(yù)后判斷等方面

的研究意義。

七、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:

取一定量的 10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)品貯備液用試劑三 緩沖液

標(biāo) 準(zhǔn) 標(biāo) 準(zhǔn) 0mmol/L

100μmol/L 200μmol/L 500μmol/L 1000μmol/L

2000μmol/L

1.png

 微量分型巰基測試盒

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