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內(nèi)源性一氧化碳(CO)-測(cè)試盒 生化試劑

內(nèi)源性一氧化碳(CO)-測(cè)試盒,根據(jù)碳氧血紅蛋白(HbCO)和還原血紅蛋白(Hb)吸收光譜的差異,選擇 HbCO 吸光度之差而 Hb 吸光度之差為零的兩個(gè)波長(zhǎng),應(yīng)用雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定樣本在這兩個(gè)波長(zhǎng)下的吸光度差值(△OD),再通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出 HbCO 百分濃度,代入公式計(jì)算出內(nèi)源性一氧化碳(CO)含量。

產(chǎn)品型號(hào):

更新時(shí)間:2025-01-23

內(nèi)源性一氧化碳(CO)-測(cè)試盒

(測(cè)血清、血漿)

一、測(cè)定原理:

根據(jù)碳氧血紅蛋白(HbCO)和還原血紅蛋白(Hb)吸收

光譜的差異,選擇 HbCO 吸光度之差而 Hb 吸光度之差為

零的兩個(gè)波長(zhǎng),應(yīng)用雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定樣本在這兩個(gè)波

長(zhǎng)下的吸光度差值(△OD),再通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出 HbCO 百分

濃度,代入公式計(jì)算出內(nèi)源性一氧化碳(CO)含量。

二、試劑組成及配制:(100T/50 樣)

試劑一:溶血?jiǎng)?/span>100mL×1 瓶,4℃保存。

試劑二:緩沖液,100mL×3 瓶,4℃保存。

試劑三:碳氧血紅蛋白測(cè)定粉劑×10 瓶,4℃避光密封保存。

碳氧血紅蛋白測(cè)定工作液的配制:臨用前,往每瓶測(cè)定粉劑

中加入 23mL 試劑二緩沖液,加蓋顛倒混合,使

溶解,現(xiàn)用現(xiàn)配,用多少配多少,2 小時(shí)內(nèi)用完,用

黑袋注意避光。

試劑四:制作 HbCO 百分曲線用的還原粉劑×6 支,4℃避光

密封保存。

試劑五:血紅蛋白 Hb 測(cè)定濃縮液,1mL×2 支,4℃避光密封

保存。

血紅蛋白 Hb 測(cè)定應(yīng)用液的配制:臨用前將濃縮液用蒸餾水 1∶

99 稀釋,即 100 倍稀釋,現(xiàn)用現(xiàn)配。配好的試劑 2~

8℃避光保存,可存放 1 個(gè)月以上。

三、操作步驟:

1、血清(漿)中血紅蛋白 Hb 測(cè)定及計(jì)算:

0.05mL 樣本(血清 、血漿)與 2.5mL 的血紅蛋白測(cè)

定應(yīng)用液(即將試劑五的濃縮液進(jìn)行 100 倍稀釋),混勻,

靜置 5 分鐘后,1cm 光徑蒸餾水調(diào)零,540nm 測(cè)定各管吸光

度值。

血紅蛋白含量的計(jì)算:

血紅蛋白含量(g/L= Α540 ×367.7

2、 樣本前處理:

①、制備溶血液:取抗凝全血 0.01mL,加入試劑一溶血?jiǎng)?/span>

1.2mL 混勻,靜置 5 分鐘,使溶血。

②、制備測(cè)定樣本:取制備好的溶血液 0.1mL,加待測(cè)血漿

0.1mL,混合后制備成測(cè)定樣本

③、制備對(duì)照樣本:取制備好的溶血液 0.1mL,加待測(cè)雙蒸

0.1mL,混合后制備成對(duì)照樣本

四、碳氧血紅蛋白(HbCO)百分濃度曲線:

【可自行制作 HbCO 百分濃度曲線,也可參照本所提供的 HbCO

百分濃度曲線】

飽和碳氧血紅蛋白與飽和還原血紅蛋白的制備

1、取不吸煙健康人肝素抗凝全血 0.01mL,加入試劑一溶血液

1.2mL 混勻,靜置 5 分鐘使溶血。

2、從中取 2 份,每份 0.2mL,加入到兩支具塞試管中,再分

別加入 2.3mL 試劑二緩沖液,混勻。

3、在通風(fēng)櫥內(nèi),向其中一支試管里通純一氧化碳(CO),連

續(xù)通 15 分鐘,再通入氮?dú)?20 分鐘,得到飽和 HbCO 溶液。

4、再向另一支試管通氧氣(O2),連續(xù)通 20 分鐘,得到飽和

HbO2溶液。

五、檢測(cè)意義:

一氧化碳(carbon monoxide,CO)是與一氧化氮(NO)

極相似的小分子氣態(tài)物質(zhì)。90 年代以來(lái)的大量研究揭示,生

物體內(nèi)源性CO不僅作為一種新型的神經(jīng)遞質(zhì)參與中樞神經(jīng)系

統(tǒng)的信息傳遞,還具有舒張血管、抑制血管平滑肌和血管內(nèi)

膜增殖、抑制血小板聚集、調(diào)節(jié)體內(nèi)激素分泌、抑制細(xì)胞凋

亡等多種生物學(xué)功能,在機(jī)體多種生理及病理狀態(tài)中發(fā)揮重

要的作用。

六、計(jì)算公式:

碳氧血紅蛋白百分濃度(HbCO%)的計(jì)算:

通過(guò)分別測(cè)定 568nm 與 581nm 的吸光度,計(jì)算△OD

A568-A581)的吸光度值差。再由標(biāo)準(zhǔn)曲線,通過(guò)回歸

方程計(jì)算出碳氧血紅蛋白百分比濃度,即 HbCO%。

【注 1】如不直接制作百分濃度曲線,也可參照本所提供

的百分濃度曲線,回歸方程為:

y = 0.822x + 0.001

x 即為△OD(A568-A581)的吸光度值,y 即為碳氧血紅蛋白

百分比濃度。

HbCO%=[ 0.822×△OD(A568-A581+0.001 ]×

【注 2】 A568 HbCO 吸光度之差的波長(zhǎng);A581 Hb 吸

光度之差為零的波長(zhǎng)。

血清/血漿中 Hb 的測(cè)定步驟及計(jì)算公式:

0.05mL 樣本(血清/血漿)與 2.5mL 的血紅蛋白測(cè)定應(yīng)

用液(即將試劑五的濃縮液進(jìn)行 100 倍稀釋),混勻,靜置 5

分鐘后,1cm 光徑蒸餾水調(diào)零,波長(zhǎng) 540nm 測(cè)定各管吸光度

值。

血紅蛋白含量的計(jì)算:

血紅蛋白含量(g/L= Α540 × 73.54

 內(nèi)源性一氧化碳(CO)-測(cè)試盒

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